【佳學基因檢測】糖尿病的正確用藥基因解碼：離子通道突變基因檢測

糖尿病治療藥物介紹

磺脲類藥物，如托布曼和格列齊特，可以刺激胰島β細胞分泌胰島素。成功的磺脲類藥物治療會通過與SUR亞單位相互作用，直接和間接機制來抑制KATP通道，從而增強KIR6.2亞單位對ATP的敏感性，從而在細胞內(nèi)較低的ATP濃度下刺激通道關閉，實現(xiàn)對糖尿病患者的降糖作用。根據(jù)《降糖類藥物效果對基因檢測的要求》，糖尿病磺脲類藥物主要包括以下幾種： 氨磺脲類藥物（Sulfonylureas）：如格列吡嗪（Glibenclamide）、格列美脲（Glimepiride）、格列齊特（Gliclazide）等。它們通過促進胰島β細胞釋放胰島素來降低血糖水平。 磺酰脲類藥物（Meglitinides）：如雷帕格林（Repaglinide）和諾格列?。∟ateglinide）。它們也促進胰島β細胞釋放胰島素，但作用機制與氨磺脲類藥物略有不同。 這些藥物通常用于2型糖尿病的治療，幫助控制血糖水平。然而，具體的藥物選擇和使用方式應由醫(yī)生根據(jù)患者的情況來決定。同時，這些藥物也可能會有一些副作用和限制條件，因此請務必遵循醫(yī)生的建議和注意使用說明。比如：從治療角度來看，如果患者體內(nèi)存在功能增益型基因突變，則使用這類藥難以獲得良好效果，因為它們相對耐受磺脲類藥物。

糖尿病的藥物指導基因檢測為什需要對患者進行深度基因檢測？

鉀攜帶的KATP通道在許多細胞類型中將細胞代謝狀態(tài)轉(zhuǎn)化為電生理特性。在胰島β細胞中，高細胞內(nèi)ATP水平和低MgADP水平抑制KATP通道的活性，使細胞稍微去極化，從而釋放胰島素。KATP通道是由KIR6.1或KIR6.2蛋白組裝而成的四聚體孔形成部分，分別由KCNJ8和KCNJ11編碼，周圍由ABCC8和ABCC9編碼的SUR1或SUR2A/B蛋白四聚體環(huán)繞。具有功能獲得性基因突變的患者有多個組織和器官的多樣性疾病的臨床表征，如短暫或有效性新生兒糖尿?。∟D）和Cantú病。ATP結合到KIR6.2亞單位具有抑制作用，而核苷酸結合到SUR亞單位則激活通道。增益突變降低了ATP抑制通道的能力，直接通過影響ATP結合位點或間接通過增加通道開放概率，從而降低ATP的親和力。KCJN11增益突變引起糖尿病的程度與臨床表型之間存在明顯關系。攜帶輕度增益突變的KIR6.2通道導致短暫或有效性ND，而另一方面，攜帶強烈增益突變的KIR6.2通道與復雜的發(fā)育遲緩、肌無力、畸形特征、癲癇和新生兒糖尿?。―END綜合征）相關。這些強烈增益突變通常屬于間接類別。

佳學基因糖尿病致病基因鑒定基因解碼發(fā)現(xiàn)：KCNJ11的Q52R突變與DEND綜合征相關，盡管患者之間的臨床表型和治療選擇存在差異。然而，L164P突變與“較輕”的有效性ND表型相關。這兩種突變以類似的方式改變了通道動力學，即在無配體存在時增加開放概率，至少對于Q52R突變來說，這種改變與SUR亞型無關。重要的是，這兩種突變使得產(chǎn)生的KATP通道對托布曼等磺脲類藥物的反應性較低，形成使用該類藥物所要求的基因檢測的必要性。

糖尿病藥物基因解碼如何選擇正確用藥基因檢測靶點？

在根據(jù)糖尿病致病基因鑒定基因解碼，為具有特定突變的患者尋找增益突變體的潛在抑制劑，正確用藥基因解碼利用分子動力學和藥效團建模的方法篩選了潛在的KIR6.1抑制化合物（。這項工作從DrugBank數(shù)據(jù)庫中獲得了一份候選清單。并通過基于計算和體外實驗的工作擴展到抑制KIR6.2通道的化合物，包括貝他可洛爾、左貝他可洛爾、拉坦前列素和特拉前列素（化學結構見圖1B-E），以及格列本脲、乙戊磺酰胺、氟伐他汀、帕唑帕尼和地諾前列酮，重點關注Q52R和L164P增益突變。

如何根據(jù)基因突變檢測結果，為患者尋找新型治療藥物？

貝他可洛爾

在糖尿病的正確用藥基因解碼基因檢測研究中，結合電生理學和分子建模的方法，探究貝他可洛爾、特拉前列素和拉坦前列素的可能結合位點，以及這些化合物抑制KATP通道的分子機制。在這里進行的胞內(nèi)-外記錄是在缺乏浴液中的Mg-ATP和ADP的條件下進行的，以最好地模擬分子動力學的條件。這很可能導致比存在0.15毫摩爾MgATP時，格列本脲的IC50值高6-11倍，就像存在和缺乏ATP時的托布曼的阻滯測量一樣。然而，正如預期的那樣，Q52R和L164P顯示出降低的格列本脲敏感性，因此這是一種與MgATP無關的特征。這一發(fā)現(xiàn)也適用于觀察到的Q52R突變體對特拉前列素介導的抑制敏感性降低。

確定了每種化合物對IKIR6.2/SUR2a電流的內(nèi)向和外向成分的影響。從生理學角度來看，外向成分最為相關，但通過比較阻斷的電壓依賴性（內(nèi)向與外向），可以獲得關于阻斷性質(zhì)的見解，例如直接阻斷孔道與PIP2-通道相互作用的推測。

對于貝他可洛爾，在沒有SUR1的情況下進行了與KIR6.2通道孔道的分子動力學模擬。設置的動機有兩個方面：首先，電生理實驗證明，貝他可洛爾以類似的方式抑制WT以及許多經(jīng)過測試的突變體，包括L164P和Q52R。其次，據(jù)報道L164P和Q52R突變會影響KIR通道與SUR的耦合，并且在SUR結合的磺脲類藥物抑制作用方面具有部分耐藥性。由于異構抑制需要藥物以類似的方式結合來克服這兩個突變體的破壞性影響，貝他可洛爾可能是通過阻斷開放通道孔道來發(fā)揮作用，而不是通過異構性抑制通道。此外，WT通道的Hill系數(shù)為-0.98與孔道阻滯一致。假設存在孔道阻滯，因此在模擬KATP復合物時不包括SUR亞基是合理的，因為這樣減少了系統(tǒng)規(guī)模，大大降低了模擬系統(tǒng)的計算成本。

粗粒度和原子級別的分子動力學模擬顯示，貝他可洛爾結合在跨膜腔和G環(huán)門附近，它堵塞了KATP通道的離子傳導通路。類似的阻塞現(xiàn)象在KIR2.x通道家族中很常見，許多化合物，包括戊胺啉、奎尼丁和氯喹，已被證明通過阻塞細胞質(zhì)孔道來阻止離子通量。

貝他可洛爾在跨膜腔和G環(huán)門附近的結合位點位于與疾病突變L164P相鄰的位置，這可以解釋為什么貝他可洛爾能有效抑制這種突變體。基因解碼表明插入的脯氨酸主要導致孔道擴大和門區(qū)溶劑化增加，從而阻止通道的正確閉合。因此，藥物與內(nèi)部腔和/或G環(huán)門的結合將通過阻塞通道的滲透路徑來阻止離子通量。

尿病致病性突變Q52R位于連接滑動螺旋和KIR通道的C端結構域（CTD）的環(huán)狀區(qū)域，靠近PIP2結合位點。此外，6C3P結構顯示Q52延伸至SUR1的胞質(zhì)環(huán)L0，在該位置與殘基E203相距不到5埃。通過突變研究證實了Q52- KIR6.2和E203-SUR1之間的相互作用在通過SUR介導的KIR6.2門控中的作用，佳學基因解碼表明通過Cys-Cys橋連接SUR1中的E203C和KIR6.2中的Q52C可以將通道鎖定在閉合狀態(tài)。然而，Q52R突變對通道結構的影響仍需要更多的基因解碼結果。盡管如此，類似貝他可洛爾和左旋貝他可洛爾等潛在的孔道阻塞劑也能夠抑制該突變體，因此可能為對磺酰脲耐藥性DEND突變體的患者的藥物選擇提供科學依據(jù)。

如今，DEND綜合征最成功的治療方法基于通過磺酰脲類藥物對KATP通道的抑制，這些藥物與SUR亞單位結合并以變構方式發(fā)揮抑制作用。磺酰脲類藥物無法穿過血腦屏障并緩解該疾病的神經(jīng)問題，以及某些突變對這些化合物具有耐藥性，因此需要開發(fā)更多樣化的KATP抑制劑。貝他可洛爾與磺酰脲類藥物不同，它通過阻斷離子傳導通路發(fā)揮作用，因此可以歸類為一小類以通道孔為靶點的KATP通道抑制劑。其他與KIR通道有親和力的化合物包括維拉帕米、他莫西芬和羅格列酮，后兩者據(jù)基因解碼基因檢測干擾了PIP2對通道的激活作用。除了開發(fā)基于化學的內(nèi)向整流通道抑制劑和激活劑之外，短肽毒素作為通道抑制劑的研究也取得了進展。糖尿病正確用藥基因解碼基因檢測表明，小蛋白質(zhì)SpTx-1能夠通過結合KIR6.2抑制多種導致有效性神經(jīng)性糖尿病的突變，包括Q52R突變。此外，最近研究的蜈蚣毒素SsTx-4在KIR6.2/SUR1通道中表現(xiàn)出低納摩爾級的IC50值，包括Q52R突變通道。

口服劑量（40毫克，連續(xù)口服15天）后，貝他可洛爾的血漿濃度約為0.54微摩爾。對于KIR6.2/SUR2a的外向電流，觀察到大約30微摩爾的IC50值，而在5微摩爾時已經(jīng)發(fā)現(xiàn)約20％的外向電流減少。對KIR6.2通道孔有親和力的藥物可能成為抑制磺脲類耐藥性DEND突變的有效工具，這使得貝他可洛爾成為開發(fā)針對該綜合征的新型藥物的有希望的起點。

然而，需要注意的是貝他可洛爾無法足夠穿越血腦屏障（BBB），因此不太可能抑制與DEND綜合征相關的神經(jīng)和發(fā)育癥狀。

除了孔阻斷，模擬結果還揭示了貝他可洛爾的另一個相互作用位點，位于PIP2結合位點附近。支持這一發(fā)現(xiàn)的是，某些藥物據(jù)通過阻斷孔并與PIP2結合位點相互作用來影響KIR通道。其中一種化合物是氯喹，已經(jīng)證明它以這兩種方式抑制含有KIR6.2的KATP通道。在正電位下觀察到的快速電壓依賴性抑制被認為是由于對細胞質(zhì)通道孔的阻塞，而較慢的抑制可能來自藥物對PIP2結合位點的干擾導致的通道激活受損。實驗觀察到的貝他可洛爾對KATP的電壓依賴性抑制可以通過通道在中央腔或G-環(huán)附近的阻塞來解釋，從而支持貝他可洛爾作為KATP孔阻斷劑的假設。然而，靠近PIP2結合位點的藥物結合可能會額外影響電導性，就像氯喹一樣，因此我們不能排除貝他可洛爾通過一種變構效應參與KATP通道的抑制。
 

前列腺素類藥物

Travoprost和latanoprost都是前列腺素的合成類似物，屬于前列腺素類藥物。它們屬于二十碳類脂質(zhì)的一種。在與KATP通道進行的粗粒化分子動力學模擬中，travoprost和latanoprost對SUR亞單位顯示出很高的親和力。功能測量結果表明，travoprost和latanoprost都能抑制WT IKATP通道的內(nèi)向和外向成分，與顯示出電壓依賴阻滯（外向>>內(nèi)向）的貝他可洛爾相比。基于這些觀察，靶向藥物基因解碼基因檢測認為travoprost和latanoprost作用于SUR1而不是KIR6.2通道孔的可能性更大。對于這兩種藥物觀察到的多種相互作用可以解釋為SUR亞單位上存在多個結合位點。盡管從分子動力學模擬中獲得的數(shù)據(jù)顯示存在多個前列腺素的結合位點，且具有類似的親和力，但不能排除存在一個或多個高親和力結合位點的可能性。

有趣的是，在6C3P的模擬中，發(fā)現(xiàn)了兩個與KATP調(diào)節(jié)重要位點相鄰的結合簇。簇6顯示了travoprost和latanoprost與KIR亞單位上的抑制性ATP結合位點的近距離結合。簇11顯示了travoprost與SUR亞單位的退化位點的結合。由于ATP結合到KIR或SUR都會產(chǎn)生調(diào)節(jié)效應，化合物結合到這些結合位點或接近這些結合位點可能會與ATP調(diào)節(jié)該通道的能力競爭或改變。然而，佳學基因正在的揭示KATP調(diào)節(jié)機制，這些化合物調(diào)節(jié)通道的機制還沒有被披露出來。

在DEND綜合征的背景下，基于對SUR結合親和力的藥物治療方法可能不是最佳選擇。原因在于，一些導致DEND綜合征的突變，包括Q52R和L164P，會影響SUR與KIR通道孔的耦合。這可能削弱了與SUR結合的KATP通道抑制劑的效果，并增加了預測抑制效率的不確定性。進一步對這類藥物與KATP通道的結合行為進行表征可能對于治療其他KATP通道病變是有趣的。

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