【佳學(xué)基因檢測(cè)】TCRgamm/delta免疫細(xì)胞療效的DNA解碼

人類V_γ9V_δ2 T細(xì)胞是一種獨(dú)特的T細(xì)胞類型，近期對(duì)V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的研究數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了它們?cè)?a href='http://m.lucasfraser.com/cp/zhongliu/' target='_blank'>癌癥免疫治療中的潛在相關(guān)性。V_γ9V_δ2 T細(xì)胞具有雙重特性，因?yàn)樗鼈兗仁强乖蔬f細(xì)胞，也對(duì)癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。大部分V_γ9V_δ2 T細(xì)胞在共受體CD4和CD8上均呈陰性，只有20-30%的細(xì)胞表達(dá)CD8。盡管它們大多被忽視，但少部分V_γ9V_δ2 T細(xì)胞也表達(dá)共受體CD4。作者在這里顯示，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞占外周血V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的0.1-7%。這些細(xì)胞可以通過使用來普酸、帕米酸或與IL-2和飼養(yǎng)細(xì)胞來 擴(kuò)增。與大多數(shù)傳統(tǒng)的CD4⁺ αβ T細(xì)胞不同，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞具有強(qiáng)大的細(xì)胞毒性，可以殺死癌細(xì)胞。這里通過對(duì)待以來普酸的不同組織來源的癌細(xì)胞株（包括乳腺癌、前列腺癌和黑色素瘤細(xì)胞株）的殺傷來展示這一點(diǎn)。值得注意的是，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的殺傷能力與CD56的共表達(dá)相關(guān)。

_γδ T細(xì)胞是一種T細(xì)胞亞群，它們表達(dá)由_γ鏈和_δ鏈組成的T細(xì)胞受體（TCR），而不是α和β TCR鏈。_γδ T細(xì)胞比αβ T細(xì)胞少得多，在人體外周血中，主要的_γδ T細(xì)胞亞群是V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。這些細(xì)胞僅在人類和高等靈長(zhǎng)類動(dòng)物（以及羊駝）中發(fā)現(xiàn)，占外周血淋巴細(xì)胞的0.5-5%。

與需要HLA I類和II類分子進(jìn)行抗原識(shí)別的αβ T細(xì)胞不同，V_γ9V_δ2 T細(xì)胞以HLA非限制方式應(yīng)答一組稱為磷酸抗原（pAg）的小型非肽分子。V_γ9V_δ2 T細(xì)胞識(shí)別pAg的確切機(jī)制尚未有效理解。V_γ9V_δ2 T細(xì)胞識(shí)別pAg的確切機(jī)制尚未有效理解。然而，pAg與丁酸酸分子，特別是丁酸酸3A1和2A1之間的相互作用，對(duì)V_γ9V_δ2 TCR正確識(shí)別pAg是必要且充分的。異戊烯焦磷酸（IPP）是一種pAg，是所有生物細(xì)胞利用的mevalonate途徑和非mevalonate途徑的終產(chǎn)物。為此，應(yīng)激誘導(dǎo)的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T細(xì)胞，而自然產(chǎn)生的IPP水平則不足以激活。癌細(xì)胞產(chǎn)生的IPP水平高于正常細(xì)胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T細(xì)胞感知。這表明V_γ9V_δ2 T細(xì)胞可能具有作為應(yīng)激感應(yīng)T細(xì)胞的作用，并在識(shí)別癌細(xì)胞方面發(fā)揮潛在的關(guān)鍵作用。

V_γ9V_δ2 T細(xì)胞識(shí)別pAg的確切機(jī)制尚未有效理解。然而，pAg與丁酸酸分子，特別是丁酸酸3A1和2A1之間的相互作用，對(duì)V_γ9V_δ2 TCR正確識(shí)別pAg是必要且充分的。異戊烯焦磷酸（IPP）是一種pAg，是所有生物細(xì)胞利用的mevalonate途徑和非mevalonate途徑的終產(chǎn)物。為此，應(yīng)激誘導(dǎo)的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T細(xì)胞，而自然產(chǎn)生的IPP水平則不足以激活。癌細(xì)胞產(chǎn)生的IPP水平高于正常細(xì)胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T細(xì)胞感知。這表明V_γ9V_δ2 T細(xì)胞可能具有作為應(yīng)激感應(yīng)T細(xì)胞的作用，并在識(shí)別癌細(xì)胞方面發(fā)揮潛在的關(guān)鍵作用。

V_γ9V_δ2 T細(xì)胞是人類外周血單個(gè)核細(xì)胞中最主要的也是了解最清楚的_γδT細(xì)胞亞群。這些細(xì)胞容易在佳學(xué)基因免疫細(xì)胞生產(chǎn)技術(shù)體系中容易獲得極高的純度和大幅度的擴(kuò)增。佳學(xué)基因致力于開發(fā)細(xì)胞療法，以補(bǔ)充現(xiàn)在的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞療法。如果顯示出優(yōu)越性，有可能替代它們。因此，佳學(xué)基因檢測(cè)全面研究了V_γ9V_δ2 T細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兛梢灾苯訌耐庵苎獑蝹€(gè)核細(xì)胞中擴(kuò)增，并且具有特異性殺傷癌細(xì)胞的能力。

在佳學(xué)基因的擴(kuò)增培養(yǎng)的研究中，反復(fù)觀察到一小部分CD4⁺_γδT細(xì)胞。由于V_γ9V_δ2 T細(xì)胞可以通過不同的nBP擴(kuò)增，佳學(xué)基因研究了ZOL和PAM是否可以在體外不同程度地?cái)U(kuò)增CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。在PAM和ZOL擴(kuò)增的培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)了不同的CD4⁺細(xì)胞群體。然而，在CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的頻率上并沒有明顯差異，盡管在某些培養(yǎng)中ZOL似乎更有利于CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。

為了評(píng)估CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的存在是否表明它是人類外周血V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的真實(shí)亞群，抑或只是體外擴(kuò)增培養(yǎng)形成的獨(dú)物細(xì)胞群，佳學(xué)基因?qū)碜越】等说耐庵苎獑蝹€(gè)核細(xì)胞進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)分析。佳學(xué)基因發(fā)現(xiàn)，在所有測(cè)試的健康人中確實(shí)存在少量但明顯的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞（占V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的0.1-7%）。由于V_γ9V_δ2 T細(xì)胞，能夠識(shí)別癌細(xì)胞，佳學(xué)基因檢測(cè)在腫瘤患者的白細(xì)胞分離樣本中尋找CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。結(jié)果顯示，在這些樣本中也存在數(shù)量相近的獨(dú)特細(xì)胞群體。因此，佳學(xué)基因免疫細(xì)胞治療的研究清楚 地表明CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞不僅存在于佳學(xué)基因體外培養(yǎng)的免疫細(xì)胞中，這一功能細(xì)胞群同樣也存在于癌癥患者的免疫細(xì)胞中。

佳學(xué)基因解碼的研究表明，人體內(nèi)的αβ T細(xì)胞上的CD8分子通過與HLA-I分子相互作用發(fā)揮協(xié)同刺激作用。同樣，對(duì)于CD4⁺αβ T細(xì)胞，CD4分子與HLA-II分子相互作用并向T細(xì)胞提供協(xié)同刺激信號(hào)。但是，沒有基因解碼的參與，關(guān)于CD8在V_γ9V_δ2 T細(xì)胞中的作用知之甚少，并且DN和CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞之間的差異沒有得到清晰的描述。因此，佳學(xué)解碼基因更詳細(xì)地研究CD8和CD4在V_γ9V_δ2 T細(xì)胞中的潛在作用?？紤]到體內(nèi)CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的存在比例較低，佳學(xué)基因解碼DNA試圖通過體外擴(kuò)增后再研究這些細(xì)胞，以便更全面地研究它們的表型和功能。佳學(xué)基因免疫細(xì)胞療法利用FACS和REP獲得了純凈的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞亞群。這些經(jīng)過培養(yǎng)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中保持純度，并且CD4的表達(dá)穩(wěn)定。在治療性免疫細(xì)胞的究過程中，其他機(jī)構(gòu)嘗試了多次純化CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。然而，與CD4相比，這并不成功。佳學(xué)基因研究了這些結(jié)果，因?yàn)榕cCD4⁺ T細(xì)胞（0.1-7%）相比，通過培養(yǎng)可以獲得CD8⁺（20-30%）T細(xì)胞要多得多。在這些由其他機(jī)構(gòu)開展的基因檢測(cè)與免疫療法的研究中，免疫細(xì)胞提供者制備了多個(gè)純凈的FACS分選CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物，但是在擴(kuò)增后純度降至45-85％，剩余的細(xì)胞為DN細(xì)胞。同樣，佳學(xué)基因檢測(cè)還觀察到，分選的DN V_γ9V_δ2 T細(xì)胞在擴(kuò)增后轉(zhuǎn)變?yōu)楹?-20%的CD8⁺細(xì)胞。分選的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物中仍無法檢測(cè)到CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞。盡管在BD FACSAria流式細(xì)胞儀分選時(shí)使用了保守的篩選策略以去除其他細(xì)胞亞群（這一策略在分選CD4 _γδ T細(xì)胞時(shí)被證明是非常有效的），并且分選了五個(gè)不同的批次，但無法正式排除分選期間的污染。雖然佳學(xué)基因還沒有有效證實(shí)這一理論，但基因解碼表明，表明CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細(xì)胞之間存在持續(xù)的轉(zhuǎn)化，反之亦然。

正如佳學(xué)基因免疫細(xì)胞治療的研究所揭示的那樣，V_γ9V_δ2 T細(xì)胞可以在由nBP致敏后殺死癌細(xì)胞。對(duì)佳學(xué)基因的解碼基因過程進(jìn)行仔分析后發(fā)現(xiàn)，有一項(xiàng)DNA解碼描述了CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞在健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞和V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)存在，并證明這些培養(yǎng)后的T細(xì)胞表現(xiàn)出Th1細(xì)胞因子分泌譜。然而，除了細(xì)胞因子釋放之外，沒有進(jìn)行功能性試驗(yàn)。利用純凈且穩(wěn)定的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物，佳學(xué)基因發(fā)現(xiàn)在nBP致敏后，前列腺癌、黑色素瘤和乳腺癌細(xì)胞被這一免疫細(xì)胞殺死的情況。雖然傳統(tǒng)的CD4⁺ T細(xì)胞通常不具有細(xì)胞毒性，但是基因解碼研究發(fā)現(xiàn)了具有細(xì)胞毒性的CD4⁺ αβ T細(xì)胞，它們通過在HLA-II分子背景下識(shí)別腫瘤抗原直接殺傷腫瘤細(xì)胞，或者通過釋放細(xì)胞因子激活其他免疫細(xì)胞間接殺傷。直接殺傷需要表達(dá)HLA-II分子，這在黑色素瘤中是一個(gè)常見現(xiàn)象；然而，大多數(shù)其他實(shí)體癌都對(duì)HLA-II呈陰性。其他研究機(jī)構(gòu)還無法揭示CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物識(shí)別癌細(xì)胞的識(shí)別元素的任何信息，這實(shí)際上可能依賴于多種分子。

CD56在許多細(xì)胞類型上表達(dá)，但佳學(xué)基因指出CD56的表達(dá)在自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞上的表達(dá)最明顯。在研究CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的表型和功能過程中，佳學(xué)基因還研究了CD56分子的表達(dá)。CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞上CD56表達(dá)的呈出雙模形式，而在REP培養(yǎng)中，所有的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細(xì)胞都是CD56⁺。區(qū)分CD56⁺和CD56- CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物使佳學(xué)基因能夠研究這些細(xì)胞的細(xì)胞溶解能力是否與CD56的表達(dá)相關(guān)。佳學(xué)基因的研究表明，CD56的表達(dá)與CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞毒活性相關(guān)，如使用從五個(gè)健康人的針對(duì)前列腺癌細(xì)胞系的培養(yǎng)物顯示出相似的結(jié)果。這說明表達(dá)CD56的V_γ9V_δ2 T細(xì)胞群體比CD56-亞群具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性效應(yīng)，并且這種細(xì)胞毒性功能是在刺激增殖的過程中獲得的。佳學(xué)基因的研究還發(fā)現(xiàn)CD56⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞能更有效地殺傷人類鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞。此外，表達(dá)CD56的αβ T細(xì)胞具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性效應(yīng)和促炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生，如IFN_γ和TNFα]。DNA解碼還觀察到，表達(dá)CD56的V_γ9V_δ2 T細(xì)胞中，IFN_γ、TNFα和CD107a的細(xì)胞因子表達(dá)增加。然而，在DNAM-1、NKG2D和NCR的表達(dá)上沒有發(fā)現(xiàn)差異。綜上所述，佳學(xué)基因認(rèn)為CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞殺傷能力與CD56的表達(dá)相關(guān)。

佳學(xué)基因免疫細(xì)胞療效的基因解碼研究了腫瘤活檢樣本（來自39種癌癥的約18,000個(gè)樣本），在影響腫瘤患者預(yù)后的22種種因素中，_γδ T細(xì)胞排在首位。盡管如此，V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的臨床試驗(yàn)顯示出有限的臨床成功?？赡苡泻芏嘣?，免疫細(xì)胞界對(duì)V_γ9V_δ2 TCR多樣性的理解有限，對(duì)受體-配體相互作用的認(rèn)識(shí)也受限，對(duì)V_γ9V_δ2 T細(xì)胞種群的功能多樣性影響的低估也是一個(gè)問題。佳學(xué)基因發(fā)現(xiàn)，在V_γ9V_δ2 T細(xì)胞庫(kù)中的克隆之間，腫瘤識(shí)別存能力變化是出奇地大，這表明V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的多樣性可能在功能上非常重要。V_γ9V_δ2 T細(xì)胞是人類胎兒中最早發(fā)育的T細(xì)胞之一，并且在青春期通過與微生物（即微生物教育）的個(gè)體接觸，V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的多樣性逐漸降低。因此，每個(gè)成年人的_γδ T細(xì)胞庫(kù)在_γδTCR多樣性和可能的功能多樣性方面都是獨(dú)特的。因此，目前對(duì)V_γ9V_δ2 T細(xì)胞庫(kù)內(nèi)多樣性的理解受到佳學(xué)基因關(guān)注。免疫能力基因解碼的數(shù)據(jù)提供了關(guān)于存在于健康和癌癥患者的V_γ9V_δ2 T細(xì)胞種群內(nèi)的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞了解，從而有助于更好地了解V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的多樣性。需要注意的是，在基因解碼過程中，V_γ9V_δ2 T細(xì)胞培養(yǎng)物受到大量IL-2的影響。因此，這項(xiàng)研究的弱點(diǎn)在于作者無法排除CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的反應(yīng)性與CD56的相關(guān)性是否是由于體外使用高濃度IL-2引起的假象。需要進(jìn)行其他研究以確定這些細(xì)胞是否在體內(nèi)與免疫系統(tǒng)的獨(dú)特功能相互作用，包括這些細(xì)胞是否在自發(fā)或治療誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)中對(duì)癌癥發(fā)揮作用。

免疫細(xì)胞的療效研究表明V_γ9V_δ2 T細(xì)胞中有一小部分表達(dá)輔助受體CD4，佳學(xué)基因的數(shù)據(jù)支持了這一存在?；诿庖吡Υ笮〉幕蚪獯a，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞可以在健康人群和癌癥患者的PBMC中找到，占外周血V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的0.1％至7％。佳學(xué)基因描述CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞殺死癌細(xì)胞的能力，而且殺傷能力與CD56的表達(dá)相關(guān)。佳學(xué)基因開發(fā)了細(xì)胞毒性CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細(xì)胞細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，獲得了V_γ9V_δ2 T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的標(biāo)記。

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